ELISpot檢測(cè)最初于1980年代初開發(fā)并報(bào)道，用于計(jì)數(shù)分泌特異性抗體的B細(xì)胞，隨后，該技術(shù)被調(diào)整并應(yīng)用于定量人或小鼠樣本中產(chǎn)生特定細(xì)胞因子的免疫細(xì)胞。自此，ELISpot技術(shù)開始迅速發(fā)展，并與ELISpot圖像分析相結(jié)合，目前已廣泛用于免疫學(xué)研究和臨床應(yīng)用，可用于測(cè)量多種類型免疫細(xì)胞對(duì)微生物病原體、疫苗以及外來或自身抗原的抗原誘導(dǎo)或自發(fā)性特定細(xì)胞因子反應(yīng)。它的檢測(cè)原理為：炎癥細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子被膜上的捕獲抗體捕獲，并通過二級(jí)檢測(cè)抗體與在捕獲的細(xì)胞因子部位沉淀形成可見斑點(diǎn)的底物結(jié)合進(jìn)行可視化。與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）相比，ELISpot測(cè)定的優(yōu)勢(shì)在于不僅可以測(cè)量單細(xì)胞水平的細(xì)胞因子反應(yīng)，而且對(duì)產(chǎn)生特異性細(xì)胞因子的細(xì)胞具有更高的檢測(cè)靈敏度。目前ELISpot已成為主流免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一，在國(guó)內(nèi)外免疫學(xué)界獲得了高度的認(rèn)可和廣泛的關(guān)注，那么它有哪些優(yōu)點(diǎn)呢？

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

1. 高靈敏度：ELISpot理論上可達(dá)到百萬分之一的靈敏度，即一百萬個(gè)細(xì)胞中只要有一個(gè)分泌細(xì)胞因子的陽性細(xì)胞就能檢測(cè)出來。

2. 單細(xì)胞水平：檢測(cè)的是單個(gè)細(xì)胞分泌，而非細(xì)胞群體的平均分泌，對(duì)研究生物體的細(xì)胞免疫和細(xì)胞功能提供有效的檢測(cè)策略。

3. 功能性檢測(cè)：動(dòng)態(tài)的免疫檢測(cè)，斑點(diǎn)代表分泌細(xì)胞在一段時(shí)間內(nèi)的分泌動(dòng)態(tài)，即“Footprint”。斑點(diǎn)的強(qiáng)弱和數(shù)量反映了細(xì)胞對(duì)刺激物的反應(yīng)能力和分泌細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)能力。

4. 高通量檢測(cè)：整個(gè)流程基于96孔微孔板，適用于高通量實(shí)驗(yàn)和篩選。

5. 重復(fù)性和檢測(cè)性高：凍存的細(xì)胞同樣可進(jìn)行ELISpot檢測(cè)。

達(dá)優(yōu)ELISpot應(yīng)用領(lǐng)域及案例：

1. 疫苗研發(fā)：用于評(píng)估疫苗誘導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)。

案例：2020年CDE發(fā)布的《新型冠狀病毒預(yù)防用mRNA疫苗藥學(xué)研究》指導(dǎo)原則中強(qiáng)調(diào)了mRNA疫苗的質(zhì)量研究需要進(jìn)行體內(nèi)效力試驗(yàn)，推薦使用ELISpot技術(shù)檢測(cè)評(píng)價(jià)mRNA疫苗的細(xì)胞免疫反應(yīng)；2025年發(fā)表文章中也有使用ELISpot技術(shù)檢測(cè)評(píng)估納米疫苗的免疫反應(yīng)^[1]等；

2. 基因治療：檢測(cè)基因治療過程中可能引起的免疫反應(yīng)

案例：Kathryn團(tuán)隊(duì)在AAV基因治療藥物Roctavian?的III期臨床試驗(yàn)中，通過IFN-γELISpot試驗(yàn)檢測(cè)了16名受試者對(duì)AAV5衣殼蛋白的細(xì)胞免疫反應(yīng)^[2]；

3. 臨床診斷

案例：Oxford Immunotec公司開發(fā)了全球第一個(gè)基于ELISpot原理的T-SPOT.TB結(jié)核病診斷試劑盒，用以定量檢測(cè)患者血液或體液標(biāo)本中結(jié)核效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)（即顯色的斑點(diǎn)數(shù)）來判斷患者結(jié)核分枝桿菌感染狀態(tài)，輔助臨床診斷和排篩結(jié)核。

4. 器官移植

案例：器官移植之前，應(yīng)用ELISpot對(duì)供體與受體做免疫相容性檢測(cè)，HLA匹配，則供受體細(xì)胞之間相容性好，較少刺激物斑點(diǎn)，提示移植手術(shù)成功率高，反之亦然。在器官移植手術(shù)后，用ELISpot監(jiān)視患者體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng)，可以有針對(duì)性的用藥，避免盲目的使用免疫抑制劑。

5. 免疫學(xué)基礎(chǔ)研究

案例：根據(jù)檢測(cè)的細(xì)胞因子的不同，ELISpot可以用來區(qū)分被激活的不同的T細(xì)胞亞群。例如Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些細(xì)胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2細(xì)胞分泌的。在過敏研究中的一個(gè)熱點(diǎn)就是采用ELISpot測(cè)定Th2型細(xì)胞因子，因?yàn)?/span>Th2反應(yīng)是過敏的主要反應(yīng)，但通常都是低頻率岀現(xiàn)，需要高度靈敏方法才能被成功檢測(cè)到。

那么達(dá)優(yōu)可以為大家提供哪些種屬及指標(biāo)的ELISpot試劑盒呢？

產(chǎn)品列表

達(dá)優(yōu)ELISpot產(chǎn)品采用高親和力、高效價(jià)抗體對(duì)，經(jīng)預(yù)包被PVDF板、低溫冷凍干燥、真空密封包裝等工藝流程制備。成品PVDF板上預(yù)包被的抗體分布均勻、效價(jià)穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)時(shí)間從3天縮短為2天，大幅度減少無菌操作的實(shí)驗(yàn)步驟，減輕實(shí)驗(yàn)者的勞動(dòng)強(qiáng)度和減少污染的機(jī)會(huì)。使得實(shí)驗(yàn)者能夠輕松、高效地完成復(fù)雜的ELISpot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。